体外酶活性测定

影响酶活性检测的因素

酶稀释

在测定酶活性时,稀释后测量的酶活性通常被稀释并乘以被认为是原始酶活性的稀释因子,但稀释有几种作用:影响稳定性;降低2个原始样品中的辅因子或抑制剂浓度。因此在实践中,许多酶活性与稀释因子不成比例。所选酶的稀释比实际上是酶分子和底物之间的关系,并且仅在适当的范围内,测量的酶活性与稀释比成比例。

底物浓度

除了选择合适的基材外,基材的溶解度是一个不容忽视的因素。原则上,底物浓度不影响酶活性,但底物浓度越高,酶反应越快,酶活性越大。当底物浓度达到一定水平时,酶反应是稳定的,因此当测量酶活性时,底物用于使酶饱和,使得酶活性不依赖于底物浓度和底物范围。必须超过临界值。10-20公里(三重县)。

温度

由于酶对温度非常敏感,检测过程中应注意温度控制±1°C为佳。

温度对酶活性的影响主要是由于两个方面。另一方面,温度升高,酶反应速率增加,酶活性增加。另一方面,如果温度太高,则酶变性并失活,导致酶活性降低。

因此,为了选择最佳温度,可以准确地测量酶活性,但酶活性测量温度可能因酶而异,因此酶活性测量温度将不同且均匀然而,大多数酶具有最高的酶活性,合适的温度为37-40℃。

pH值

与温度一样,PH对酶活性的测量具有重要影响。过量的酸或过量的碱会破坏酶的空间结构并解离酶的催化活性部分。结合基团和酶活性丧失。

然而,由于酶活性随着pH在特定范围内的增加而增加,因此必须选择最佳pH以精确测量酶活性。



酶辅因子是低分子量有机物质或金属离子,可与酶蛋白自由结合。例如,锌离子是羧肽酶和醇脱氢酶的辅基,锰离子是精氨酸酶的辅基。

离开修复基团或辅酶基团不能激活这些酶,因此测量酶活性可保证修复基团或辅酶的供应。

6)

活化剂和抑制剂

一些酶在活化物质存在下具有活性或活性。例如,Mg2 +是肌酸激酶的激活剂,Cl-是淀粉酶的激活剂。

因此,在确定酶活性时,还必须满足激活酶的需要。


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